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每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的柠檬酸缓冲液()进行显色反应，10-20min内测定405nm波长下的od值。结果显示，本发明单克隆抗体为igg2b型鼠源单克隆抗体。二、亲和常数测定包被msh6重组蛋白，包被浓度为2μg/ml,100μl/孔，4℃包被过夜，pbs-t洗3次。每孔加200μl封闭液37℃封闭2h，pbs-t洗3次。实施例4中纯化的单克隆抗体，从1：200开始2倍梯度稀释，***1孔留空白对照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp标记的羊抗鼠二抗1：20000稀释，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的柠檬酸-磷酸缓冲液显色10min，加50μ。用酶标仪测定波长450nm的吸光值。画出od值对应抗体稀释倍数的曲线，找出≥1/2“平台od值”对应的稀释倍数a。利用下列公式计算出亲和常数为×109。三、单抗反应特异性和应用效果选择msh6重组蛋白，用免疫印迹的方法检测本发明单克隆抗体的识别特异性，免疫印迹实验过程如下：每种蛋白上样约5-10ng，福建专注dMMR抗体检测试剂共同合作，福建专注dMMR抗体检测试剂共同合作，福建专注dMMR抗体检测试剂共同合作，进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳。按常规方法在bio-rad电转移系统中将凝胶蛋白带转移到pvdf膜上(millipore公司)。将膜置于含5％脱脂奶粉的tbs-t封闭液中4℃过夜。加入单克隆抗体msh6。【迈杰转化医学】开发的dMMR抗体检测试剂,检测费用低,技术成熟,临床易开展。福建专注dMMR抗体检测试剂共同合作
MSI-H结直肠ai的比例(22％)高于Ⅲ期结直肠ai(12％)，而在Ⅳ期liu中*占％，提示MSI-H结直肠ai发生转移的风险较低。特别是在Ⅱ期结直肠ai患者中，MSI状态是提示预后的**预测因子，MSI-Hliu预后好于MSSliu。Ⅱ期结直肠ai复发的高危因素包括：liu组织学类型为低分化ai、有脉管／神经侵犯、淋巴结检出数量不足12个、发生梗阻或穿孔以及切缘阳性，但如liu为MSI-H型，则低分化不属高危因素。2．指导***：研究发现，MSI-H结直肠ai对5-氟尿嘧啶和顺铂等化疗药物不敏感，而对伊立替康等化疗药物敏感，同时MSI结直肠ai对放疗比较敏感。美国国立综合ai症网络(NCCN)的结直肠ai临床实践指南明确指出，对MSI-H结直肠ai不宜采用5-氟尿嘧啶和铂类为主的***方案。3．Lynch综合征患者筛查：Lynch综合征患者较常见同时性或异时性多发结直肠ai，如果术前能明确Lynch综合征的诊断，外科医师有可能采取更为***的切除术式。Lynch综合征患者不*发生结直肠ai的风险增高，而且可以发生子宫内膜ai、卵巢ai、尿路上皮ai等多种肠外恶性liu，有研究表明，阿司匹林能够预防Lynch综合征相关结直肠ai及肠外liu的发生。由于Lynch综合征与大家熟知的家族性腺瘤**肉病(FAP)不同。云南推荐dMMR抗体检测试剂口碑推荐迈杰多平台的研究优势以及多组学数据的挖掘能力，促进产学研医结合，加速项目成果转化，创新科技产品研发。
50岁，结直肠liu或其他liu家族史阳性、吸烟、超重、有胆囊手术史、血吸虫病史等，可考虑用阿司匹林等非甾体***药和选择性环氧合酶－2抑制剂***，但必须注意药物不良反应及使用禁忌证。二级预防即结直肠腺瘤摘除后预防再发或恶变。目前，学术界比较公认的预防腺瘤切除术后复发的药物是非甾体***药和选择性环氧合酶－2抑制剂。另外，补充钙剂和维生素D、高纤维饮食、肠道代谢物如短链脂肪酸也被认为具有一定的预防价值。2011年发表的《中国结直肠liu筛查、早诊早治和综合预防共识意见(二)》对于我国结直肠ai化学预防给出了明确的指导意见。由于内镜检查依从性较差，结合我国城乡卫生资源分布不均衡的现状，完全依靠内镜下摘除结直肠腺瘤预防结直肠ai发生的方案并非完美。上述共识建议辅助相应以药物或环境干预为基础的一级预防。预防结直肠腺瘤发生或再发是结直肠ai化学预防的**终目的。五、我国结直肠ai筛查及预防工作中的问题1.对结直肠ai认识不足、人群筛查依从性较差：随着我国经济和现代化建设的深入，我国公民饮食结构及生活方式较30年前发生了较大改变，结直肠ai近20年发病率及病死率不断攀升。结直肠ai本身疾病特点鲜明，发病隐匿、恶变时间长、早期liu***率高。
MMR）突变而易患结直肠ai和其他恶性liu的一种常染色体显性遗传性疾病，占结直肠ai的2%~5%。该综合征曾被命名为遗传性非腺瘤性结直肠ai（HNPCC），后因该命忽略了肠外liu的高发率而弃用。已知MLH1、MSH2、MSH6和PMS2这四种MMR基因与林奇综合征的发生密切相关。大多数林奇综合征家（85%~90%）检测到的是MLH1和MSH2突变，剩余的10%~15%的家族存在MSH6的突变，少数存在PMS2的突变[7]。同时，已有研究表明：绝大多数林奇综合征都具有高水平微卫星不稳定性（MSI-H）的现象[8]。林奇综合征发病年龄较早，平均年龄为45岁，明显低于正常人群发生结直肠ai的平均年龄（60岁）。林奇综合征患者的结肠ai好发于近端结肠，70%～85%的liu位于结肠脾区附近。这些liu具有特异的组织病理学特征，比如髓样生长的ai、粘液腺ai或liu区过多的淋巴细胞浸润。林奇综合征患者在其一生中易发生多处原发liu，据统计有54%～61%的林奇综合征患者会发生第二种原发liu，更有甚者，部分患者会发生三种或更多的原发liu[7]。这些liu包括有子宫内膜ai、胃ai、卵巢ai、尿路liu、肝胆liu、胰腺ai等。因此，当确诊的林奇综合征患者在发现***处结直肠ai时就会被建议进行更大的结肠次全切除术或全切术。迈杰转化医学希望能和创新型药企共同探索创新生物标志物的临床应用潜力。
三、我国结直肠ai的筛查策略结直肠ai筛查策略包括筛查对象、筛查方法、筛查流程、筛查频率、筛查间隔和确诊后的规范***及随访等。各国应根据本国国情制订筛查策略并适时进行更新和补充。依据2011年10月由中华医学会消化病学分会颁布的《中国结直肠liu筛查、早诊早治和综合预防共识意见》，我国结直肠ai筛查的策略如下：1.人群筛查：我国结直肠ai的筛查目标人群为50～74岁者。这符合我国结直肠ai发病规律，从50岁开始明显上升，75～80岁达到高峰，然后缓慢下降。国外相关研究结果显示：不必将76～85岁高龄人群作为筛查目标人群。结合我国人均寿命、结直肠ai高发年龄等国情，故将人群筛查**高年龄定位在74岁。我国人口基数较大，且结直肠ai发病率逐年上升，潜在患病人群庞大，在筛查中***应用纤维结肠镜，其卫生经济成本势必巨大，且纤维结肠镜为有创检查，在普通人群中***应用面临较大的依从性问题。故我国普遍采用初步筛查发现高危人群，对于高危人群行全结肠镜检查的序贯式筛查策略。具体的筛查方法包括FOBT、基于高危因素的问卷调查、乙状结肠镜及全结肠镜检查等，筛查周期建议为3年。对符合以下任意一项者应视为高危人群：(1)FOBT阳性。(2)ai症病史。(3)息肉病史。。迈杰转化医学为全球合作伙伴提供包括生物标记物挖掘、药物靶点验证、伴随诊断开发等一体化解决方案。云南推荐dMMR抗体检测试剂口碑推荐
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发明人还提供上述任一所述的抗msh6蛋白单克隆抗体，在msh6蛋白免疫检测中的用途。进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。区别于现有技术，上述技术方案依据msh6蛋白、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构，选择msh6蛋白第1-100位氨基酸序列与gst蛋白融合表达,其dna编码序列为seqid**,用大肠杆菌进行表达，得到免疫原。对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗msh6蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系abm58060-20a2-pu,以及由该细胞系所分泌的抗msh6蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达msh6蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。化染色结果图(左为abm58060-20a2-pu分泌的msh6，右为市售msh6)。具体实施方式实施例1重组msh6蛋白片段的制备一、抗原片段选择依据uniprot中登录号为p52701的蛋白质序列进行序列和二级结构分析，全长为1360个氨基酸长度的msh6蛋白含有muts超家族区域，其分子量约为152kda左右，依据通过在线服务器测的蛋白的二级结构(secondarystructure)和表面可及性(surfaceaccessibility)参数，并通过对其抗原性指数(jamesonba,:(1):181-6.)的分析结果。福建专注dMMR抗体检测试剂共同合作
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