[VIP第1年] 指数:3
下游引物)：5’-cattactgagaacaatccgtaggc-3’(序列表中sedid**6)；cav2-p(taqman荧光探针)：5’-quasar705-gtcttctgccaacatgctttatccc–bhq3-3’(序列表中sedid**7)。cav2-p的报告荧光基团为quasar705，荧光淬灭基团为bhq3。cdv-p(taqman荧光探针)：5’-cy5-cctttggaggaggacagttgccttcttat-bhq2-3’(序列表中sedid**8)。cdv-p的报告荧光基团为cy5，荧光淬灭基团为bhq2。cpv-p(taqman荧光探针)：5’-fam-atggcaaacaaatagagcattgggcttacc-bhq2-3’(序列表中sedid**9)。cpv-p的报告荧光基团为fam，荧光淬灭基团为bhq2。cpiv-p(taqman荧光探针)：5’-hex-actgcaagatcagagtgaggaaggtacaatcc-bhq2-3’(序列表中sedidno：20)。cpiv-p的报告荧光基团为hex，荧光淬灭基团为bhq2。为防止pcr扩增时被延伸，所述探针的3’端已经磷酸化处理。实施例2，汉南区治好细小病菌收费标准、cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测、提取基因组dna或rna使用axypreptmbodyfluidviraldna/rnaminiprepkit(axygen公司)对cav-ii、cpv，汉南区治好细小病菌收费标准、cdv和cpiv的细胞培养物(用于获得标准品和阳性对照)以及待测样品提取基因组dna或rna，汉南区治好细小病菌收费标准，具体方法包括以下步骤：(1)axygen试剂盒准备：按试剂盒说明书。武汉狗狗动物医院！！汉南区治好细小病菌收费标准
高免血清与其他抗jun消yan药同时使用，可提高免疫效果。2、补液：病犬常因脱水而死，因此补液是治聊本病的主要措施。应根据犬的脱水程度与全身状况，确定所需添加的成分和补液量，一般静脉补液量为60毫升/千克体重。可以分为静脉补液、口服补液和腹膜腔补液。3、抗jun消yan：可应用各类广谱抗生su，但不要长时间使用，以防肠道正常菌群失调，反而延缓肠道消化功能的恢复。4、止吐：呕吐严重者可肌注爱茂尔、灭吐灵(胃复安)—2毫升。5、抗休克：休克症状明显者可肌注**5—15毫克。6、加强护理：注意对病犬保暖，腹泻期间应停喂牛奶、鸡蛋、肉类等高蛋白、高脂肪性饲料，给予易消化的饲料，以碱轻胃肠负担，提高治yu率。五、给宠物主人的建议：1、应做好免疫接种。国内生产的犬细小病du病灭活疫苗都与其他疫苗联合使用。使用犬五联弱毒疫苗时，对30—90日龄的犬应注射3次，90日龄以上的犬注射2次即可，每次间隔为2—4周。以后每半年加强免疫1次。2、犬患有本病后，应及时隔离，对犬舍和饲具，用2%-4%烧碱、1%福尔马林、。江夏区一般的细小病菌地址光谷宠物医院哪家好？
按照10倍梯度将标准品混合液稀释至1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101copies/μl的梯度浓度作为标准样品，每个标准样品做3个重复，以不同浓度的标准样品作为模板，在实施例1中的引物和taqman探针的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测。其中实时荧光定量pcr的反应体系(25μl)如下表2所示：表2：四重实时荧光定量pcr的反应体系试剂名称体积(μl)2×onestepu+mix(购自vazyme公司)(购于vazyme公司)μm-4×混合引物μm-4×混合探针：反转录52℃15min；95℃2min；pcr扩增条件：95℃15s，56℃30s，45个循环。各标准品的实时荧光定量pcr扩增曲线如图2所示，标准品扩增曲线为平滑的“s”形曲线(阳性)，图2中六组不带符号的线条从左向右对应的是cpv标准品，标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl；六组带△的线条从左向右对应的是cpiv标准品，标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl；六组带□的线条从左向右对应的是cav2标准品，标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl；六组带×的线条从左向右对应的是cdv标准品。
（1）单抗的早期使用病的主要措施。应根据犬的脱水程度与全身状况，确定所需添加的成分和补液量，一般静脉补液量为60毫升/千克体重。①静脉补液5%葡萄糖液，维生素，，一次缓慢静脉滴注，2次/日。输液中要严格控制输液量和输液速度，注意心脏的功能状况，否则易造成失败。当病犬表现严重呕吐、腹泻时需纠正脱水、电解质紊乱和酸碱平衡，可静脉滴注乳酸林格氏液50～500毫升（PS：较为严重应该请求医生采用注射用碳酸氢钠。），25%葡萄糖液5～40毫升，盐酸山莨菪碱（6542）注射液0。3～1毫升，2次/日。②中期以后酸中毒较为严重，可以采用碳酸氢钠注射液，氯化钾注射液，可混合在溶剂（氯化钠注射液）***同使用，可以很好的解决酸中毒情况。[1]③腹膜腔补液如病犬静脉滴注困难，可行腹膜腔补液，用量为70毫升/千克体重。（3）可应用各类广谱，但不要长时间使用，以防肠道正常菌群失调，反而延缓肠道消化功能的恢复。（4）止吐呕吐严重者可肌注爱茂尔、灭吐灵（胃复安）～2毫升。注：呕吐主要为胃酸分泌过多狗狗长期未进食导致，胃酸分泌的同时还会导致狗狗肠胃蠕动给狗狗加剧痛苦，此时可以使用盐酸山莨菪碱（6542）注射液配合奥美拉错注射液（胶囊）来使用。 武汉点点宠物医院！！
使用所述试剂盒对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测时，将单一包装的阳性对照品混合或直接使用混合包装的阳性对照品。上述试剂盒中还包括标准品：cav-ii标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品；各标准品为单一包装或等浓度混合包装；使用所述试剂盒对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行四重实时荧光定量pcr检测时，将单一包装的标准品等浓度混合或直接使用混合包装的标准品。上述的引物和taqman探针组或上述的试剂盒在对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行非疾病诊断目的的检测中的应用。上述的检测应用为用实时荧光定量pcr技术对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu进行非疾病诊断目的的定性、定量检测方法，包括以下步骤：1)建立标准曲线：将cav-ii标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品等浓度混合，按照10倍梯度将混合液中各标准品浓度稀释至1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103、1×102、1×101copies/μl；以不同浓度的标准品混合液作为模板。武汉哪有好的宠物医院？江夏区一般的细小病菌地址
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分别对步骤、cpv、cdv和cpiv基因组dna或rna进行pcr(定量pcr仪，型号cfx96，购自美国伯乐)扩增，分别得到cav-ii、cpv、cdv和cpiv的目的片段，25μl的pcr反应体系如下表1所示，pcr反应条件为：dna预变性95℃10min；pcr扩增条件(针对rna)：95℃15s，56℃30s，72℃45s，35个循环，72℃7min；rna反转录52℃15min；95℃2min；或pcr扩增条件(针对dna)：95℃15s，56℃30s，72℃45s，35个循环，72℃7min。表1：pcr扩增体系、标准品制备将纯化回收的cav-ii、cpv、cdv和cpiv含检测基因的目的片段分别克隆至pcrtopo载体(购自invitrogen公司)中，构建成重组质粒，并筛选阳性重组质粒送上海生工公司测序，验证质粒构建是否成功。测序结果表明获得了序列正确的分别携带cav-ii、cpv、cdv和cpiv目的基因的4个重组质粒，分别命名为pcrtopo-cav2-standardplasmid、pcrtopo-cdv-standardplasmid、pcrtopo-cpv-standardplasmid、pcrtopo-cpiv-standardplasmid，提取质粒dna得到标准品，分别命名为cav2标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品。、标准曲线的建立将上述cav2标准品、cpv标准品、cdv标准品和cpiv标准品分别用，并计算各标准品的拷贝数；将四种标准品等浓度混合。汉南区治好细小病菌收费标准
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