[VIP第1年] 指数:3
Vakirs等于1985年建立了金标免疫滲滤技术，该技术原理是：先用胶体金标记二抗，随后将抗原物质包被于醋酸纤维素或硝酸纤维束膜，后采用特定形状的塑料卡盒及吸水滤纸等组装垂直渗滤装置。反应过程是；先将检测样品（血清）加在反应膜上，若样品中存在被检特异性抗体，则检测样品快速渗滤通过反应膜时，样品中的特异性抗体就会与包被于反应膜上的抗原结合，随后用缓冲液渗滤洗去样品中剩余的物质，再将金标二抗加于反应膜表面，当金标二抗在反应膜的渗滤过程中，金标二抗就会与结合于反应膜上的特异性抗体结合，再用缓冲液渗滤洗去未结合的金标二抗。此时，反应膜上会显示出红色的点。若样品中没有被检特异性抗体，则抗原抗体连锁反应不成立，金标二抗不会留在反应膜，也就不会出现红色的点。由于金标免疫渗滤技术操作简单，反应速度快，2-3分钟出现结果，特异性强，敏感性高，此项技术自诞生之日期，备受业界高度关注。Spielberg等于1989年建立了人类免疫缺陷病毒抗体检测金标免疫渗滤检测技术。金标免疫渗滤技术现已应用于医学临床检验，疫病预防、动物疫病防控，食品安全检测及农业病虫害检测等领域。金标渗滤法的缺陷是金标抗体有效期短，新疆金标读数仪厂家直销，一般为6个月。分别测试反射率范围为[0.2，0，新疆金标读数仪厂家直销.8]内高，新疆金标读数仪厂家直销、中、低反射率的3条质控条，CV≤3%。新疆金标读数仪厂家直销
快速诊断技术（侧向层析和渗滤测试盒）。对于该应用方向，常用的胶体金颗粒是40nm.在标记IgG时，40nm的胶体金颗粒提供较大的可视性和较小的空间位阻。分子量为160kDa的IgG分子，长度大约为8nm.40-100nm间的胶体金颗粒比较顺利标记到IgG抗体上。比40nm大的颗粒有较大的可视性，但较大胶体金颗粒在1ml溶液时520nm吸光度较小，因此较少在检测线处被捕获。综上所述，同40nm或60nm胶体金标记的抗体相比，较大颗粒的胶体金结合物对1-10ng/ml分析物具有较低的灵敏度。60nm胶体金颗粒非推荐使用，但可以应用于快速诊断分析。其不同于40nm胶体金颗粒，颜色偏浅。高质量的40nm胶体金为樱桃红色，而60nm胶体金为深粉红色。在某种情况下，样品类型可使膜上残留背景底色，这种轻微的颜色差异可以使信号容易识别。比如，含有胆红素的样本将留下的背景底色，相对褐色，粉红色较红色容易被识别。如果用于标记分子的分子量小于160kDa，20nm胶体金颗粒更适合。20nm胶体金颗粒通常用于标记链霉亲和素、A蛋白和抗原，这些被标记蛋白的分子量小于60kda.灵敏度随着快速诊断技术进步使胶体金结合物的灵敏度得到提高。新疆金标读数仪厂家直销支持多通道（可根据客户卡的大小定制，目前至多可以支持12通道）同时检测。
胶体金标记蛋白质影响因素：胶体金与蛋白质之间是通过正负电荷之间存在的范徳瓦尔引力相结合的，胶体金颗粒与蛋白质分子之间无共价键联系。胶体金标记蛋白质过程属于物理过程，标记体系的pH值、离子浓度及二者的比例等均可影响标记效果，一般情况下，当胶体金pH值接近或大于蛋白质等电点时，胶体金对蛋白质的吸附力强。反之，当胶体金pH值低于蛋白质等电点时，则会凝集而失去结合能力。如在标记葡萄球菌A蛋白（SPA）时，SPA等电点是pI5.1，胶体金的pH值可选择在pH5.9-6.2。标记单抗时，胶体金的pH值适宜在pH8.2。对于含有多种大分子蛋白的样品，如多价抗体的标记，实际上很难满足体系中各种蛋白分子的等电点的要求。为了取得较好的标记条件，可先将标记蛋白用低于pH9.0的缓冲液透析，胶体金的pH值调在pH9.0进行标记。影响胶体金标记蛋白质是否成功的另一个重要因素是胶体金与标记蛋白质的用量比例。通常蛋白质的用量取决于胶体金的颗粒大小，金颗粒直径越小，金颗粒所具有的总表面积就越大，可吸附蛋白质的量也就越大。
胶体金蛋白结合物的质量鉴定（1）胶体金颗粒平均直径的测量：用支持膜的镍网（铜网也可）蘸取金标蛋白试剂，自然干燥后直接在透射电镜下观察。或用醋酸铀复染后观察。计算100个金颗粒的平均直径。（2）胶体金溶液的OD520nm值测定：胶体金颗粒在波长510nm～550nm之间出现*大吸收值峰。用0.02Mol/LpH8.2PBS液（含1％BSA，0.02％NaN3）将胶体金蛋白试剂作1︰20稀释，OD520＝0.25左右。一般应用液的OD520应为0.2～0.4。（3）金标记蛋白的特异性与敏感性测定：采用微孔滤膜免疫金银染色法（MF－IGSSA）。将可溶性抗原（或抗体）吸附于载体上（滤纸、硝酸纤维膜、微孔滤膜），用胶体金标记的抗体（或抗原）以直接或间接染色法并经银显影来检测相应的抗原或抗体，对金标记蛋白的特异性和敏感性进行鉴定。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点。
免疫胶体金的应用1、胶体金在光镜水平、电镜水平的应用直径为3～15nm胶体金均可用作电镜水平的标记物。优点是可以通过应用不同大小的颗粒进行双重或多重标记。胶体金用于光镜水平、电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织切片中抗原的检测。2、胶体金在流式细胞仪中的应用应用胶体金标记的抗体，分析细胞表面抗原。胶体金可以明显地改变红激光散射角，区分不同的标记，能同时进行几种标记。3、凝集试验单分散的免疫金溶胶清澈透明。与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒增大、沉降，光散射随之发生变化，溶液的颜色发生变化。4、免疫印迹技术用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离，得到的区带转移至硝酸纤维素膜，与特异性的抗体保温后，再与胶体金标记物温育，根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。金免疫印迹技术有相当高的灵敏度。采用免疫金银染色法，灵敏度可低至0.1ng。5、胶体金在肉眼水平的应用--胶体金免疫结合试验互联网功能丰富，支持远程质控，远程标曲升级等云端通讯。新疆金标读数仪厂家直销
CRP项目，有证参考物质浓度范围在5μg/mL～9μg/mL时，相对偏差≤±10%。新疆金标读数仪厂家直销
胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。胶体金免疫层析(GICA)作为一种可靠的免疫学检测技术，其特异性强、灵敏度高、简便快速、无需特殊仪器设备，在动物检验检疫实际工作中有较强应用价值。目前国内已有少量兽医用商品GICA检测条生产(如瘦肉精检测条、鸡法氏囊、猪旋毛虫和新城疫检测条等)。如果加大研究开发力度，可望将GICA技术用于各种疾病的快速诊断和检测，为实现我国动物检验检疫工作的科学化、标准化和快捷化具有重要意义。新疆金标读数仪厂家直销
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